如何建造一個PCR實驗室？

廣東(dong) 正一為(wei) 您建造一個(ge) 完美的PCR實驗室-服務熱線 40006030558

為(wei) 了對以個(ge) 特定序列進行PCR做重複檢測,需要三個(ge) 不同的區域,每一個(ge) 區域的具體(ti) 技術操作和試劑在下麵詳細列出.

1、樣品準備區

這個(ge) 區域專(zhuan) 門用作樣品的準備，在製備和操作用於(yu) 核酸提取的試劑時應該采

取預防措施：

1）PCR產(chan) 物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個(ge) 房間操作。

2）組織培養(yang) 物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理，以根據應用的需要提取DNA或RNA。

3）用於(yu) 樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。

4）DNA樣品應該用有專(zhuan) 門的防護或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。

5）大體(ti) 積樣品應該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。

6）管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產(chan) 生，而且管子不能用力崩開，這樣會(hui) 產(chan) 生氣溶膠。

7）任何時候都應該穿實驗服和帶手套，手套要經常更換，尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專(zhuan) 門用於(yu) 樣品準備間，經常清洗。

2、樣品準備和RNA-PCR

  RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間汙染的機會(hui) 。為(wei) 了避免這一問題，反轉錄一步可以在樣品準備區進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止汙染的方法也有報道。

3、前PCR區

 必須有專(zhuan) 門用於(yu) 準備各種反應的區域，這個(ge) 區域必須保持幹淨，而且沒有來自克隆和樣品準備的汙染。前PCR區必須要有試劑和準備，特別是專(zhuan) 門用於(yu) 前PCR區的正壓活塞式移液管。

4、PCR實驗室試劑的操作

1）所用的所有溶液都應該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）汙染。

2）所有PCR試劑中使用的水都應該是高質量的－新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，並且是高壓滅菌。

3）在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品製備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑製擴增反應。

4）所用試劑都應該以大體(ti) 積配製，實驗一下看試劑是否滿意，然後分裝成僅(jin) 夠一次使用的量進行貯存。

5）所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。

6）新配製的試劑在用於(yu) 準備新的標本之前應該加以檢驗。

7）樣品準備和前PCR區所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。

5、在前PCR區建立PCR混合物

1）可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝並保存在-20℃或4℃，在實驗室隻涉及到擴增一種或少數幾種特異序列時這樣做很有用。

2）如果你的實驗室使用多套引物，以致於(yu) 配製包括所有試劑的單一反應混合物不夠經濟，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。

3）作為(wei) 一個(ge) 規則，應該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣品配製和PCR前過程的效率和潔淨程度。而且，你也希望通過使用一個(ge) 已知的弱陽性樣品來驗證你的樣品緩衝(chong) 液以證明裏麵不含擴增抑製物。

4）陰性樣品要與(yu) 每組樣品同時做，以分析是否存在樣品與(yu) 樣品之間的汙染以及是否存在PCR產(chan) 物的汙染，陰性對照應該包括核酸以外的所有試劑。

5）當做陽性對照時，有兩(liang) 個(ge) 理由決(jue) 定了應該使用最少數量的核酸。

6）由於(yu) 必須有對照反應，對照模板的特點應該予以考慮。

6、控製汙染的方法

已設計出很有力的酶學方法用來消除一種形式的汙染—使用UNG，這一技術能有效地消除由PCR產(chan) 物引起的汙染。另一種控製汙染的方法是使用紫外線，這種方法不能完全消除汙染問題，但可以將汙染降低幾個(ge) 數量級。

7、PCR儀(yi) 的位置

8、後PCR區

PCR完成以後，需要分析樣品並解釋數據，應該留出一個(ge) 專(zhuan) 門用於(yu) 反應後處理樣品的地方。後PCR活動中使用的所用試劑、一次性耗材和儀(yi) 器都必須是專(zhuan) 門用於(yu) 這一目的，決(jue) 不能把實驗室這一區域的試劑或儀(yi) 器用於(yu) 任何前PCR活動。